Prueba de VIH

Uni-GoldTM HIV

Fundamento.

El Virus de la Inmunodeficiencia Humana (VIH) es el agente etiológico reconocido como el
causante del Síndrome de Inmunodeficiencia Adquirida (SIDA).

La mayoria de los pacientes con SIDA o Complejos Relacionados con SIDA (ARC) tienen Ac para las proteinas estructurales del virus de VIH. La infeccion por VIH se diagnostica mediante la deteccion de Ac especificos para el virus. Actualmente se conocen dos tipos de VIH, HIV-1 y HIV-2 con 40-60% de aminoacidos homologos entre las dos cepas. 

La prueba para VIH Uni-Gold™ de Trinity Biotech es un inmunoensayo rápido basado en el
principio del sándwich inmunocromatográfico.

El procedimiento se fundamenta en las proteínas recombinantes que representan las regiones inmunodominantes de las proteínas de la envoltura de VIH-1 y VIH-2, las glucoproteínas gp41, gp120 (VIH-1) y la glucoproteína gp36 (VIH-2), respectivamente, en la región de prueba de la tira de nitrocelulosa. Estas proteínas también están ligadas a oro coloidal y quedan impregnadas debajo de la región de prueba del dispositivo. También se sensibiliza una banda estrecha de la membrana de nitrocelulosa como región de control.

Durante la prueba, se aplican dos gotas de suero, plasma o sangre en el receptáculo para muestras, seguido de dos gotas de tampón de lavado y se deja que avance la reacción. Los anticuerpos de cualquier clase de inmunoglobulinas, específicos para las proteínas recombinantes VIH-1 o VIH-2, reaccionarán con los antígenos ligados al oro coloidal. El complejo de proteína del anticuerpo/oro coloidal se mueve cromatográficamente a lo largo de la membrana hasta las regiones de ensayo y control del dispositivo de prueba.

Objetivo.

Aplicar el metodo cromatrografico para realizar la prueba de VIH adecuadamente asi mismo comprender y poner en practica las medidas de seguridad que permiten a un TLC mantenerse fuera de alcanse o en riesgo de infectarse debido a algun error durante el proceso de la practica. 

Material:

Cronometro 

Equipo de venopuncion 

Centrifuga (opcional)

Cartucho de prueba 

Almacenamiento y Estabilidad.

El dispositivo de prueba para VIH Uni-Gold™ de Trinity Biotech y la solución de lavado se pueden almacenar a 2-27°C.
Ninguno de los componentes del kit debe utilizarse después de su fecha de vencimiento.
No congelar. 

Deseche todas las muestras, cartuchos y pipetas utilizadas ya que son capaces de provocar infeccion, (transmicion).

Recoleccion y Conservacion de la Muestra.

Se puede utilizar sangre, suero o plasma.

Sangre completa: Si se usa sangre obtenida por punción de un dedo, recoger las gotas de sangre obtenidas de la punta del dedo con la pipeta suministrada y dejar caer las gotas de la pipeta sobre el dispositivo.Si una muestra ha comenzado a coagular, no volver a mezclarla antes de la prueba. En dicho casos, pipetear el suero limpio de la muestra coagulada y usarlo para el análisis.
Si se ha usado un anticoagulante para la muestra de sangre, se puede usar sangre directamente sobre el dispositivo usando la pipeta suministrada. Si la prueba no se va a efectuar inmediatamente, guardar las muestras a 2-8°C por un mínimo de tres días o, preferentemente, centrifugar la muestra y retener el plasma para futuras pruebas.

Suero o plasma: El suero o plasma puede conservarse durante siete días a 2-8ºC. En el caso de un almacenamiento más prolongado, congelar las muestras. Evitar someter las muestras a ciclos repetidos de congelamiento/descongelamiento.

Procedimiento:

1. Todo reactivo/muestra que se almacenó a bajas temperaturas debe retirarse del frío y dejar atemperar durante al menos 20 minutos para alcanzar la temperatura ambiente.

2. Llenar una de las pipetas desechables suministradas con la muestra (suero/plasma/sangre).

3. Agregar cuidadosamente dos gotas de muestra (60 μl aproximadamente) sosteniendo la pipeta sobre el receptáculo para la muestra.

4. Añadir 2 gotas (60 μl aproximadamente) de reactivo de lavado a dicho receptáculo para la muestra.

5. Dejar reaccionar durante 10 minutos desde el momento de la adición del reactivo de lavado (resultados notables entre 5 -10 min).

Interpretacion de Resultados. 

NEGATIVO Una sola línea en la región de control es indicativa de un resultado negativo.
POSITIVO Una línea de cualquier intensidad que se forme en la región de prueba, más una línea que se forme en la región de control indican un resultado positivo.
INDETERMINADO No aparece ninguna línea en la región de control. Repetir la prueba con un dispositivo nuevo. Esto es independiente de cualquier línea que pudiera aparecer en la región de prueba.    

 Conclusion.

El oportuno diagnostico de HIV es de vital importancia ya que si el resultado es positivo permite al paciente iniciar si tratamiento inmediatamente y mejorar su calidad de vida a largo plaso. 

En el ambito pertinente al TLC es necesario considerar la facilidad con la que el virus se puede transmitir por lo cual el uso apropiado de las medidas de seguridad es fundamental al manejar este tipo de muestras. 

El metodo cromatrografico que utiliza Uni-GoldTM HIV detecta la presencia de Ac producidos por la infecciond el virus HIV, sin embargo, se deben realizar pruebas confirmatorias como ELISA, Western Blot y PCR.